X-Gal

X-Gal este un substrat cromogenic al ß-galactozidazei. X-Gal este utilizat împreună cu Isopropil-b-D-1-tiogalactozidă (IPTG) (I1401) pentru detectarea activității ß-galactozidazei în coloniile bacteriene într-un test colorimetric pentru a distinge recombinații (albi) de non-recombinați (albaștri). X-gal este clivat la legătura ß1-4 între galactoză și partea 5-Bromo-4-cloro-3-indolil a X-Gal de către ß-galactozidază prin hidroliză. Clivajul enzimatic al X-Gal duce la producerea unui precipitat albastru de dicloro-dibromo-indigo insolubil în apă. În strategiile de clonare cu vectori precum Lambda-11, M-13mp18 și 19, pUC18 și 19, pUR222, gena lacZ a E. coli este transformată în celule lac-. După transformare, celulele prezintă activitate ß-galactozidază în prezența mediilor care conțin IPTG și X-Gal. Inserția unui fragment de ADN în siturile de clonare ale genei lacZ duce la întreruperea activității ß-galactozidazei, ceea ce duce la apariția coloniilor albe pe mediile care conțin X-Gal și IPTG. Celulele non-recombinante produc un colorant albastru indigo pe aceste medii.