Descriere
The E.Z.N.A.® Endo-Free Plasmid DNA Maxi Kit oferă o metodă eficientă pentru izolarea la scară largă a ADN-ului plasmidic cu endotoxine reduse. Sistemul utilizează seringi cu filtru de clarificare a lizatelor în loc de centrifugare pentru a clarifica rapid lizatele bacteriene după liza alcalină. După clarificarea lizatelor, endotoxinele sunt îndepărtate, iar protocolul urmează o procedură simplă de tip „legare-spălare-eliberare” pentru a furniza ADN plasmidic de înaltă calitate. Randamentele variază în funcție de numărul de copii ale plasmidului, tulpina de E. coli și condițiile de creștere. 50-200 mL de culturi bacteriene în mediu LB produc de obicei 0,6-1,2 mg de ADN plasmidic cu număr mare de copii. Până la 500 mL de cultură pot fi procesate atunci când se lucrează cu plasmide cu număr mic de copii. Sistemul folosește tehnologia de centrifugare sau vid pentru purificarea plasmidelor și elimină coloanele gravitaționale consumatoare de timp care necesită precipitare cu alcool. ADN-ul plasmidic purificat este potrivit pentru aplicații sensibile ulterioare, cum ar fi transfectarea celulelor mamifere, clonarea, secvențierea automată a ADN-ului fluorescent (lecturile tipice depășesc 800 bp), secvențierea de generație următoare, digestia cu enzime de restricție, ligarea, PCR, transcripția in vitro, transformarea etc.
