Descriere
Kitul E.Z.N.A.® FastFilter Plasmid DNA Mini este conceput pentru purificarea rapidă a ADN-ului plasmidic de înaltă calitate din până la 5 mL de cultură, urmând metoda de liza alcalină. Kitul dispune de o coloană inovatoare și unică FastFilter Mini, integrată într-o coloană obișnuită HiBind® DNA Mini, pentru a combina clarificarea lizatelor și legarea ADN-ului într-unul sau două etape de centrifugare, în funcție de volumul culturii. Timpul protocolului este de doar 9 minute când se începe cu un pellet bacterian dintr-un volum de cultură de până la 3 mL. Timpul protocolului pentru volume de cultură mai mari de 3 mL va fi ușor mai lung din cauza celor două etape de centrifugare pentru clarificarea lizatelor. După etapele de spălare și eluție, ADN-ul plasmidic purificat este imediat gata pentru diverse aplicații ulterioare, cum ar fi screening-ul de rutină, digestia cu enzime de restricție, transformarea, PCR și secvențierea ADN-ului.
De obicei, până la 5 mL de cultură bacteriană peste noapte în LB sau alt mediu de creștere adecvat este centrifugată pentru a precipita celulele bacteriene. Celulele sunt apoi lizate în condiții alcaline și ulterior neutralizate pentru a forma un precipitat floculent alb. Lizatul neutralizat este apoi transferat într-o coloană FastFilter Mini integrată într-o coloană HiBind® DNA Mini. După ajustarea condițiilor de legare, lizatul este centrifugat prin această configurație FastFilter HiBind® pentru a clarifica lizatul și a facilita legarea ADN-ului de coloana HiBind® DNA Mini. Coloană FastFilter Mini este aruncată, iar coloana HiBind® DNA Mini este supusă la două etape de spălare pentru a elimina sarea și alți contaminanți. ADN-ul plasmidic de înaltă calitate este apoi eluat într-un tampon de eluție cu conținut scăzut de sare și este gata de utilizare într-o gamă largă de aplicații ulterioare menționate mai sus.
