Descriere
Kitul E.Z.N.A.® Endo-Free Plasmid DNA Midi oferă o metodă eficientă pentru izolarea pe scară largă a ADN-ului plasmidic cu endotoxine reduse. Sistemul utilizează seringi cu filtru de clarificare a lizatelor în loc de centrifugare pentru a clarifica rapid lizatele bacteriene după liza alcalină. După clarificarea lizatelor, endotoxinele sunt eliminate, iar protocolul urmează o procedură simplă de „legare-spălare-eliberare” pentru a furniza ADN plasmidic de înaltă calitate. Randamentele variază în funcție de numărul de copii ale plasmidului, tulpina de E. coli și condițiile de creștere. 15-50 mL de culturi bacteriene în mediu LB produc de obicei până la 200 µg de ADN plasmidic cu număr mare de copii. Până la 100 mL de cultură pot fi procesate atunci când se lucrează cu plasmide cu număr mic de copii. Sistemul folosește tehnologia de centrifugare sau vid pentru purificarea plasmidelor și elimină coloanele de curgere gravitațională care necesită precipitare cu alcool, economisind astfel timp. ADN-ul plasmidic purificat este potrivit pentru aplicații sensibile ulterioare, cum ar fi transfectarea celulelor mamifere, clonarea, secvențierea automată a ADN-ului fluorescent (lecturile tipice depășesc 800 bp), secvențierea de generație următoare, digestia cu enzime de restricție, ligarea, PCR, transcripția in vitro, transformarea, etc.
